晶欣 重组人纤粘连蛋白片段GX100B 转染

晶欣 重组人纤粘连蛋白片段GX100B 转染  产品货号：GX100B 

产品组分：重组人纤粘连蛋白 2.5mg，该试剂以1 mg/ml 溶液形式提供。【含有12.5 mM柠檬酸钠(pH 6.2)和1.25%蔗糖的无菌溶液。】

储存条件：-20℃

注意：（1）最多可冻融10次。

          （2）不要剧烈混合溶液。不要涡旋。

产品介绍：

该重组人纤维连接片段（rFN-CH-296），由三个功能结构域组成：细胞结合域 、肝磷脂结合域和CS1位点。该片段通过协助靶细胞和病毒粒子的共定位来增强逆转录病毒介导的基因转导。其作用原理是：逆转录病毒载体与肝磷脂结合域结合，细胞表面VLA-5及 VLA-4分别与该纤连蛋白的细胞结合域 和 CS-1位点结合。

在经重组人纤粘连蛋白片段包被的培养容器表面，细胞与病毒载体高浓度共存，从而提高基因感染效率。

感染方案：

1.逆转录病毒与该重组人纤粘连蛋白片段包被的培养板结合，去除逆转录病毒上清液后加入靶细胞。但去除上清液会减少抑制性分子(例如，从生产细胞分泌的分子，如蛋白聚糖、病毒包膜蛋白)，从而降低病毒介导的基因转导效率。

2.细胞与病毒上清液混合并结合到重组人纤粘连蛋白片段包被的培养板上。

两种方案均可用于有效的基因转导。尽管方案1广泛适用，但具体实验方案可能仍需根据靶细胞、载体、靶基因进行修改。

需要准备设备：

未经处理的组织培养板或培养皿

电动移液器

移液器

无菌移液器

带滤芯的无菌吸头

生物安全柜或超净工作站

显微镜

二氧化碳培养箱

孔板离心机

试剂：

无菌PBS(-)

 HBSS/Hepes (Hank's Balanced Salt溶液，添加2.5% (v/v)1 M Hepes)

 2%牛血清白蛋白(BSA Fraction V) /PBS 溶液

晶欣 重组人纤粘连蛋白片段GX100B 转染  产品货号：GX100B 

实验方案：

1. 重组人纤粘连蛋白片段包被培养板的制备

将重组人纤粘连蛋白片段包被于培养板上，浓度20-100μg/ml的重组人纤粘连蛋白片段可达到4-20μg/cm²的包被密度。

（1）包被前，用无菌PBS将该溶液稀释至20-100μg/ml。【请提前计算重组人纤粘连蛋白试剂的用量，如：2.25ml浓度为20μg/ml的重组人纤粘连蛋白溶液放入直径为35mm的培养皿（9cm²）中时，用于包被的密度为5μg/cm²】

注意：为避免重组人纤粘连蛋白片段丢失，请勿将PBS稀释的重组人纤粘连蛋白溶液过滤除菌。

（2）将适当体积（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml。）的无菌重组人纤粘连蛋白溶液分配到每个板中，让板在室温下静置2小时或在4℃过夜。

注意:在此步骤中应使用未经处理的细胞培养级组织培养板或培养皿。

（3）移除重组人纤粘连蛋白溶液，然后用适量含无菌2%牛血清白蛋白(BSA，Fraction V)的PBS溶液进行封闭（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml），让板在室温下静置30分钟。

（4）移除BSA溶液，用适当体积的HBSS/Hepes或PBS清洗一次。除去洗涤液后，即可使用。重组人纤粘连蛋白片段包被板可用封板膜密封，并在4℃下储存—周。

2.基因转导

使用重组人纤粘连蛋白试剂进行基因转导的方法有两种:重组人纤粘连蛋白结合病毒感染法(A方法)和上清液感染法(B方法)。在A方法中，逆转录病毒颗粒首先结合到涂有重组人纤粘连蛋白试剂的板上，去除病毒上清液后加入靶细胞。在B方法中，将病毒溶液和靶细胞混合，然后添加到重组人纤粘连蛋白片段包被板中。

如果病毒溶液未经纯化直接用于病毒感染，可能会因为污染导致基因转导效率降低。在这种情况下，推荐使用A方法，通过将病毒与重组人纤粘连蛋白试剂结合并去除上清液来去除抑制物。

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