Stemcell Lymphoprep 淋巴细胞分离液

产品名称： Stemcell  Lymphoprep 淋巴细胞分离液

产品货号:  07851

产品规格：500 ml

产品品牌：Stemcell

产品简介：

Lymphoprep是一种无菌、内毒素含量低的即用型分离液，是目前国内外分离正常人或病人外周血单个核细胞(PBMC:Mononuclear cells of Peripheral blood)(包括单核细胞monocytes和淋巴细胞lymphocytes)的常用方法，具有与昂贵的GE公司的PLUS或PREMIUM分离液同样的指标。

产品应用

人外周血、骨髓和脐带血淋巴细胞分离

骨髓、胎盘间充质干细胞分离

产品参数：

成分：泛影葡胺钠(Sodium diatrizoate)：9.1% (w/v)；多糖：5.7% (w/v)

密度：1.077±0.001g/ml

渗透性：290±15mOsm

内毒素含量：<1.0EU/ml

分离所得PBMC中红细胞的含量：整个细胞数目的3-10%。

产品原理

PBMC与血液中的其他成分存在密度差异，利用密度在1.077±0.001g/ml之间而且近于等渗的LymphoprepTM溶液作密度梯度离心时，红细胞和粒细胞由于密度大，故沉于分离液底部。PBMC密度稍低于分离液，故位于分离液界面上，获得PBMC。LymphoprepTM分离液含有多糖（polysacccharide）,多糖能粘附在细胞表面，使红细胞和粒细胞聚集下沉，但它对淋巴细胞的活性和红细胞和粒细胞进一步分离有负面影响。

注意事项：

该分离液仅适用于人体的外周血液，不适用于动物。

使用该分离液时，需将待分离的血液用生理盐水做等体积的稀释。

分离液的保存应置于无菌环境，并避光保存。

详细操作步骤见产品说明书。

操作步骤（仅供参考）

第一步、

在含有抗凝剂（EDTA、heparin、或ACD）的管子内收集血液，或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后，后续实验的要求，一般选取EDTA即可。

第二步、

用等体积的0.9%的NaCl溶液（即生理盐水）稀释血液。

第三步、

在12-15ml的离心管内，将6ml稀释后的血液铺在3ml分离介质Lymphoprep上。

此处铺层可以采用从上面铺，或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起，要界面分层清晰。

第四步、

在室温下——20摄氏度左右，用水平转子，800g的离心力，离心20分钟。（如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起，离心时间延长为30分钟）。

第五步、

离心后，离心管内位于血液和分离液界面处的明显的一层即为淋巴细胞层。

用移液管直接吸取淋巴细胞层，注意，不要去除上面的血液层，而是直接吸取。移至另一离心管中。

第六步、

用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液（生理盐水）稀释收集到的淋巴细胞，在250g-300g的离心力下，离心10分钟，（此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml，体积过大，会降低淋巴细胞的产率），收集沉淀，即得到所需的人外周血单个核细胞，即可用于后续的实验。

产品名称： Stemcell  Lymphoprep 淋巴细胞分离液

产品货号:  07851

相关定义：

Ficoll密度梯度离心

常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。

单个核细胞

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。

这是一个含义不明确的术语，常用于指组织切片或血液白细胞组分中的单个核吞噬细胞系统或淋巴细胞或两者的混合物，是相对于多形核细胞而言的。

血细胞和密度

利用细胞的比重不同，可把血细胞分成不同的比重层次，外周血中红细胞和多形核粒细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单核细胞比重较小，为1.075～1.090。配制比重介于1.075～1.090之间的等渗液，通常用聚蔗糖(商品名Ficoll)与泛影葡胺，用此比重的等渗液作密度梯度离心，使比重大于此比重的红细胞、多形核粒细胞沉于管底，淋巴细胞和单核细胞浮于分层液与血液界面上，可用吸管吸出。这种方法分离出的淋巴细胞和单核细胞称为单个核细胞。在干细胞采聚过程中，外周血或骨髓中的造血干细胞比重亦与淋巴细胞和单核细胞相同。因而，分离的单个核细胞中含有造血干细胞。

血液中的细胞成分。根据细胞质中有无血红蛋白，血细胞被分为红细胞和白细胞。白细胞根据其胞质中有无颗粒又分为有粒白细胞和无粒白细胞。有粒白细胞又根据其颗粒的染色特性分为嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞和中性粒细胞。无粒白细胞又根据其大小、核质比例和染色性质分为单核细胞和淋巴细胞。