转染效率低？这份细胞转染攻略，快收藏了吧！

从导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可将转染分为瞬时转染和稳定转染。

瞬时转染（transient transfection）：指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内，该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。瞬时转染的基因表达是快速且短暂的，通常只能维持几天。这种转染方式主要用于快速检测基因功能或蛋白质表达，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小规模蛋白质生产等。

稳定转染（Stable transfected）：将外源DNA整合到宿主细胞的基因组中，这种整合过程需要更长时间和更复杂的操作。稳定转染后的基因表达是长期且稳定的，因为外源基因会被传递给子代细胞。这种转染方式主要用于长期表达目标基因的实验，例如生产重组蛋白、进行基因敲除或敲入等研究。稳定转染也用于药物筛选、研究形态变化、抗生素耐药性等领域。

细胞转染通常可分为三类途径分别为物理介导、化学介导和生物介导。

物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪等

化学介导：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法和多种阳离子物质介导技术等

生物介导：病毒介导，逆转录病毒、腺病毒等

问题来了，该怎么选择合适的转染方法呢？

小编对这三个途径的常用方法进行了总结，记得给小编点个收藏hahaha~

物理介导——电穿孔法

原理：电流能够击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内。

优点：原理简单；不需要载体。

缺点：需要特殊设备，电流对细胞伤害非常大。

化学介导——脂质体转染

原理：阳离子脂质体表面带正电荷，与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子进行包裹，形成DNA脂复合物，能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过细胞内吞进入细胞。

优点：操作比较简单，转染效率高。

缺点：需要进行条件优化；有些细胞体系不易转染；对血清敏感；价格较高。

化学介导——阳离子聚合物

原理：与脂质体转染原理相似，都是利用阳离子与核酸结合成复合物，利用细胞内吞进入细胞内。

优点：在血清内稳定；对细胞毒性相对较低；转染率高；性价比高。

缺点：需要对体系进行条件优化；有些细胞体系不易转染。

生物介导——病毒感染

原理：通过侵染宿主细胞从而将外源基因导入到细胞中。

优点：高转染率；适用性广。

缺点：需要对体系进行条件优化；需要构建病毒载体，步骤较为复杂。

然而，一种方法不会适用于所有的细胞和实验，理想的转染方法应该根据自己的细胞类型和实验需求来选择。合适的细胞转染方法应具有高转染效率，低细胞毒性和对正常生理学的影响最小，且易于使用和可重复性等特点。

细胞转染效率往往受到很多因素的影响，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑，所以细胞转染是一个常规但并不简单的实验。在进行转染实验时，需要注意以下事项：

细胞状态：确保细胞处于良好的生长状态，并在转染前处于指数生长期。

转染试剂选择：根据细胞类型和实验目的选择适当的转染试剂。

DNA/RNA质量：使用高质量的DNA或RNA，并确保其大小适宜。

转染时间：根据细胞类型和转染试剂确定最佳的转染时间。

健康细胞培养物和操作：保持细胞健康，避免RNA酶和其他污染源的污染。

纯化RNA：在转染前，使用适当的方法纯化RNA，以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和盐离子。

避免RNA酶污染：确保实验环境中没有RNA酶，防止对实验结果产生影响。

重复实验：为了确保实验结果的可靠性和可重复性，需要进行多次重复实验。

转染效率检测：转染完成后需要对转染效率进行检测，对实验数据进行正确的分析和解释，避免因误判而得出错误的结论。

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