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pcr试剂盒操作步骤及注意事项

更新时间:2022-02-18

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   PCR试剂盒操作步骤:
  (1)其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
  (2) 灵敏度高
  PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中小检出率为3个细菌。
  (3) 简便、快速
  PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
  (4) 对标本的纯度要求低
  不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
  PCR试剂盒注意事项:
  ①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
  ②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
  ③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
  ④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
  ⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
  ⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
  ⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
  ⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
  ⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
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