原代细胞培养基的冻存与复苏技术工艺

更新时间：2021-07-22

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　　原代细胞培养基用于人脐带间充质干细胞分离培养方法的研究。是培养原代细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养原代细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基是人工模拟动物细胞的体内生长环境，维持体外细胞存活和增殖的营养物质基础，其主要功能是为细胞提供适宜的pH和渗透压，以及细胞本身不能合成的各种营养物质。

　　原代细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。

　　原代细胞培养基冻存

　　1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。

　　2、贴壁细胞需用0.25％胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。

　　3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。

　　4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至（1-10）×106/ml。

　　5、将悬液分至冻存管中，每管1ml。

　　6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。

　　7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。

　　8、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（—80℃过夜）→液氮。

　　原代细胞培养基复苏

　　1、取出细胞，迅速放入37℃温水中快速解冻。