关于新药研发中 宿主细胞蛋白 那些事

宿主细胞是生产诸如重组蛋白、抗体和疫苗类药物的上游材料，不同用途的药物会采用不同的宿主细胞，重组蛋白类药物常用的细胞有中国仓鼠卵巢细胞（CHO），新型疫苗常采用非洲绿猴肾细胞（Vero）、犬肾细胞 （MDCK）、昆虫细胞、人二倍体细胞，传统疫苗还会采用大肠杆菌、鸡胚等作为宿主细胞。

宿主细胞蛋白如果残留在药物制剂中，会引起人体的免疫应答——过敏反应，如：发热、水肿，甚至休克等。人体的免疫应答性质和效果，会受到HCPs的浓度、数量和个体免疫系统差异影响而不同。药物监管部门最关注患者用药的安全性，所以HCPs的监控变得越来越重要。作为药企来说，药物研发周期很长，成功率也很低，投入和产出不是直接划等号的，因此在药品研发的中后期，药企也会非常关注生产工艺设计过程中HCPs的控制。因为，药物中HCPs残留量会影响临床试验效果，国外曾有报道，由于药企开发的新药在临床实验中出现免疫反应，导致临床实验推迟、搁置或重新设计工艺，如：易普森公司，凝血因子9(IB1001) 临床实验在2012年被搁置，2017才获批。

药品即使被成功开发，但如果想进入不同国家的市场，还要达到当地药物监管部门的标准，所以药企都会遵照不同国家药典要求，严格建立HCP监控体系。中华人民共和国药典2010年版第三部就明确规定CHO细胞残余蛋白占总蛋白含量要小于0.05%以下；对Vero细胞残余蛋白会随不同产品而异，ELISA方法检测法每个剂量不高于2微克或4微克。美国FDA认为可以接受的范围为1-100/100万，即1-100个PPM。

当前，广泛被使用于HCP检测的方法是双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）。在药物研发中，通常会建立通用和专属的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA试剂盒。到临床实验时，药企会采用专属试剂盒，即工艺特异HCP ELISA试剂盒，需要单独纯化HCP蛋白，免疫筛选抗体。

HCP ELISA的原理是先将HCP抗体包被酶标板，孵育待测样品，通过HCP抗体捕获和富集样品中HCPs，再加入与包被酶标板的抗体种属不同的，酶联报告基团的HCP抗体，结合已被富集的HCPs，通过底物显色或荧光的方式成像，最终定量计算HCPs。

HCP ELISA的方法具有特异性强、灵敏度高、通量大和使用方便等特点，但也存在风险：

ELISA方法能够富集的HCPs至少要具有两个及以上的表位。

当两个表位被抗体结合时，不能存在空间位阻。

ELISA酶标板包被的抗体结合量低，会限制HCP检出限。

不是所有HCPs都可以作为抗原产生抗体，因此会有“漏检”，所以需要评估HCP ELISA抗体的覆盖率（Coverage）。

Cygnus HCP测定法被用作行业的参考方法，或支持商业化生物制剂的制造和质量控制（QC），因此其质量声誉享誉业界和监管机构。

各种细胞系用于生产治疗性单克隆抗体和重组蛋白，下一代重组疫苗以及用于细胞和基因疗法的病毒载体。Cygnus为几乎所有表达平台提供HCP ELISA。BHK HCP ELISA，HEK293 HCP ELISA，PER.C6 ® HCP ELISA，非洲绿猴肾细胞HCP ELISA，将HeLa HCP ELISA，CHO HCP ELISA 3G，NS / 0 HCP ELISA，SP2 / 0 HCP ELISA，大肠杆菌HCP ELISA，巴斯德毕赤酵母HCP ELISA和其他细胞系HCP ELISA用于治疗性单克隆抗体和重组蛋白生产的过程开发和最终产品质量控制。