血清在细胞培养中常见问题

⚑ 正常情况下，融化后血清的外观颜色应该是？
血清为动物来源，成分复杂，不同批次间会存在一些外观上的差别。一般情况下，它们的颜色可能是金黄色、红色、琥珀棕色或者是介于三者之间。

⚑ 血清应如何保存？
未拆封的血清应存放于-15至-20℃，避免反复冻融。拆封后的血清应无菌分装成一次的用量并存放于-15至-20℃，在产品质量证书标识的效期内均可使用。2-8℃溶解后建议尽快使用。

⚑ 血清的有效期是多久？
大部分康宁血清效期是5年，针对每个批次，请通过质检文件确定具体效期日期。


⚑ 血清应如何融解？
从冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化过程中不时旋转（swirling mix）混匀。充分融解后分装或平衡到室温后使用

⚑ 为什么有时血清中出现絮状沉淀？是否需要去除？如何去除？
多种原因可能导致絮状沉淀的形成，最常见的原因之一是融化过程中，脂蛋白聚集所致。该现象一般不会影响产品质量。可以400g离心5分钟，取上清，然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径，一般的是0.22um PES材质的滤膜。为避免滤膜阻塞，建议离心后取上清加入培养基内一起过滤而不是直接过滤血清。

⚑ 为什么存放于冰箱中的血清会出现沉淀？如何避免该现象？
在2-8°C条件下存放，血清中的多种蛋白或脂蛋白会形成肉眼可见的沉淀，如血纤蛋白（fibrin），单体时处于溶解状态，在冻融过程中会发生聚集，形成肉眼可见的沉淀。但该现象一般不会影响血清的性能。可以400g离心5分钟，取上清，然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径，一般的是0.22um PES材质的滤膜。为避免滤膜阻塞，建议离心后取上清加入培养基内一起过滤而不是直接过滤血清。为尽量避免出现上述现象，建议血清分装成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反复冻融和融化后的血清在2-8°C条件下长时间放置。

⚑ 血清是否需要做灭活处理？
这取决于您的应用。
灭活过程中，会导致血清中某些成分被破坏，如氨基酸，维生素，生长因子等。所以只有在您的实验对血清有特殊要求时，才会考虑对血清进行灭活处理。如您的实验对血清中的某种组分敏感，需要去除该组分。最常见的情况是需要去除血清中的补体蛋白，因为补体在机体中参与细胞杀伤，巨噬细胞和淋巴细胞活化，肥大细胞和血小板组胺释放，平滑肌收缩等过程，所以一般在免疫学相关研究中及肌细胞和干细胞的培养过程中需要对血清进行灭活处理。

⚑ 如何进行血清灭活处理？
血清请先按上述“血清应如何融解”中的操作步骤融化和混匀，热灭活时请将血清置于56℃水浴30分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响，一次灭活的血清体积不宜过大。最好准备同样的容器装相等体积的水（与血清相同温度），灭活时将装有血清和水的容器同时放入56℃水浴, 在装水的容器中放置温度计，加热过程中不时轻轻旋转混匀血清，当温度计显示达到56℃左右，开始计时。56 ℃水浴后，建议马上转移到冰上降温。

⚑ 为什么需要对血清进行gamma射线辐照？
gamma 射线辐照的目的是灭活血清中的病毒，一般情况下，25-40kGy和30-45kGy是常用的辐射剂量。


⚑ 什么情况下需要无Ca2+/Mg2+离子的PBS？
取决于您的研究应用。除了一些Ca2+/Mg2+会影响实验结果的实验以外，一般在胰酶消化前，建议用无Ca2+/Mg2+离子的PBS清洗细胞，因为Ca2+/Mg2+会抑制胰酶活性。若消化后的贴壁细胞需要继续培养，建议消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗，因为Ca2+/Mg2+有助于细胞的贴壁过程。另外，若需要在缓冲液中长时间保存细胞，也推荐使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

⚑ 康宁无Ca2+/Mg2+离子的PBS和DPBS的区别是什么？
取决于您的研究应用。除了一些Ca2+/Mg2+会影响实验结果的实验以外，一般在胰酶消化前，建议用无Ca2+/Mg2+离子的PBS清洗细胞，因为Ca2+/Mg2+会抑制胰酶活性。若消化后的贴壁细胞需要继续培养，建议消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗，因为Ca2+/Mg2+有助于细胞的贴壁过程。另外，若需要在缓冲液中长时间保存细胞，也推荐使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

⚑ 康宁是否有注射级别（WFI）的水？
康宁细胞培养用水按照USP和/或EP 中对注射用水（WFI）的无菌要求进行质控，但康宁的该类产品为科研用产品，非临床注射用水。

⚑ 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么？
钙离子会抑制胰酶活性，EDTA作为钙离子螯合剂，可以去除钙离子，有助于胰酶更好发挥消化细胞的功能

⚑ 为什么在使用胰酶前要先清洗贴壁细胞？
目前大部分情况下，细胞培养液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分，如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建议使用无钙镁离子的缓冲液清洗细胞。